1 Радиокефир, однократное облучение

1.1 Протокол облучения

Всего в эксперименте использовали порядка 40 экспериментальных животных (мышей), разбитых на 4 группы по 10 особей в группе.

1-ая интактная группа, не подвергаемая γ – облучению.
2-ая контрольная группа, подвергнутая γ – облучению.
3-я экспериментальная группа, подвергнутая γ – облучению, предварительно в течение 10 суток получающая в качестве пищи по 1 мл ежедневно кисломолочный пробиотический продукт «ПробиоВит», предоставленный в ООО «Вега».
4-я экспериментальная группа (контрольный препарат), подвергнутая γ – облучению, предварительно в течение 10 суток получающая в качестве пищи по 1 мл ежедневно кисломолочный пробиотический продукт кефир.

Кормление животных кисломолочным продуктом осуществляли в перерыв между штатным кормлением. По завершению процедуры γ–облучения выживших животных кормили кисломолочным продуктом в течение 8 суток (ЛД 100/8 наблюдается у животных уже при дозе в 10,0 Гр). Алгоритм проведения эксперимента для группы 4 аналогичен алгоритму для группы 3, однако кормление животных осуществляется кисломолочным продуктом, выбранным и предоставленным Заказчиком в качестве сравнительного для «ПробиоВит».

##     Group                Day              Dead       
##  Length:54          Min.   : 4.000   Min.   :0.0000  
##  Class :character   1st Qu.: 5.000   1st Qu.:1.0000  
##  Mode  :character   Median : 7.000   Median :1.0000  
##                     Mean   : 7.353   Mean   :0.7692  
##                     3rd Qu.:10.000   3rd Qu.:1.0000  
##                     Max.   :11.000   Max.   :1.0000  
##                     NA's   :3        NA's   :2       
##       Date                       
##  Min.   :2022-10-03 00:00:00.00  
##  1st Qu.:2022-10-04 00:00:00.00  
##  Median :2022-10-06 00:00:00.00  
##  Mean   :2022-10-06 08:28:14.11  
##  3rd Qu.:2022-10-09 00:00:00.00  
##  Max.   :2022-10-10 00:00:00.00  
##  NA's   :3

1.2 Результаты

1.2.1 Масса

Динамика массы животых в эксперменте приведена на Рисунке 1.1

Figure 1.1: Динамика массы животных в эксперименте

1.2.2 Выживаемость

Анализ выживаемости животных в эксперименте приведен на кривой выживаемости (Каплана-Мейера) на Рисунке 1.2

Figure 1.2: Анализ выживаемости животных в эксперименте, кривая Каплана-Мейера

Для группы получавшей экспериментальный препарат сравнение с контрольной группой (группа 2) данные приведены на Рисунке 1.3

Figure 1.3: Кривая Каплана-Майера для групп 2 и 3

Анализ рисков (hazard ratio, HR) Расчёт HR для групп 2 и 3 представлен на Рисунке 1.4

Figure 1.4: HR для групп 2 и 3

Расчёт HR для групп 2 и 4 представлен на Рисунке 1.5

Figure 1.5: HR для групп 2 и 4

2 Пробиотик 2, фракционированное облучение

2.1 Протокол облучения 1 (малые группы)

1-ая контрольная группа, γ – облучение 5 фракций по 2 Гр.
2-ая контрольная группа, радиопротектор - гепарин, внутрибрюшинное введение гепарина, γ – облучение 5 фракций по 2 Гр
3-я экспериментальная группав течение 10 суток получающая в качестве пищи по 1 мл ежедневно кисломолочный пробиотический продукт «ПробиоВит», предоставленный в ООО «Вега», γ – облучение 5 фракций по 2 Гр.
4-я экспериментальная группа (контрольный препарат), в течение 10 суток получающая в качестве пищи по 1 мл ежедневно кисломолочный пробиотический продукт кефир, γ – облучение 5 фракций по 2 Гр.

##     Group                Day             Dead       
##  Length:56          Min.   :12.00   Min.   :0.0000  
##  Class :character   1st Qu.:17.00   1st Qu.:0.0000  
##  Mode  :character   Median :23.00   Median :1.0000  
##                     Mean   :26.52   Mean   :0.5536  
##                     3rd Qu.:37.00   3rd Qu.:1.0000  
##                     Max.   :37.00   Max.   :1.0000

2.2 Результаты

2.2.1 Выживаемость

Анализ выживаемости животных в эксперименте приведен на кривой выживаемости (Каплана-Мейера) на Рисунке 2.1

Figure 2.1: Анализ выживаемости животных в эксперименте, кривая Каплана-Мейера

Для группы получавшей экспериментальный препарат сравнение с контрольной группой (группа 1) данные приведены на Рисунке 2.2

Figure 2.2: Кривая Каплана-Майера для групп 2 и 3

Анализ рисков (hazard ratio, HR) Расчёт HR для групп 2 и 3 представлен на Рисунке 2.3

Figure 2.3: HR для групп 1 и 3

Расчёт HR для групп 3 и 4 представлен на Рисунке 2.4

Figure 2.4: HR для групп 3 и 4

(#fig:KM-srv_number_estimation)Оценка количесвта животных для p-val 0.05 Кривая Каплана-Майера для групп 2 и 3 - n - 28 голов

3 Пробиотик 2, фракционированное облучение, увеличенные группы

3.1 Протокол исследования

Формирование экспериментальных групп проводили через 10 суток после получения животных от ЗАКАЗЧИКА с использованием процедуры рандомизации (случайным выбором из равнозначных по массе животных). Всего сформировано 4 экспериментальных группы по 28 мышей. После формирования групп для группы 3 ежедневно проводили внутрижелудочное введение кисломолочного продукта сравнения для «ПробиоВит». Для группы 4 ежедневно проводили внутрижелудочное введение кисломолочного пробиотического продукта «ПробиоВит».

Животные в течение всего эксперимента находились в условиях конвенционального вивария в вентилируемом помещении с автоматизированной системой регулирования светового режима: 12 ч день и 12 ч ночь, при температуре 22–24град.С. Мышей содержали по 10 особей в стандартных клетках, со свободным доступом к брикетированному корму и питьевой воде.

В качестве радиопротектора использовали препарат Б-190 (индралин) в лекарственной форме – таблетки по 150 мг. Предварительно таблетку растирали в ступке и растворяли в кипяченой воде. Препарат вводили внутрижелудочно в дозе 150 мг/кг в объеме 0.5 мл за 15-30 мин до облучения. Контрольные животные получали кипяченую воду в том же объеме.

Всего в эксперименте предлагается использовать 124 экспериментальных животных (мышей), разделенных на 4 экспериментальные группы по 31 особей (с учетом животных выведенных из эксперимента на 2е сутки после окончания серии облучений):

1-ая контрольная группа, γ – облучение 5 фракций по 2 Гр.
2-ая контрольная группа, радиопротектор - Б190, внутрибрюшинное введение гепарина, γ – облучение 5 фракций по 2 Гр
3-я экспериментальная группа (контрольный препарат), в течение 10 суток получающая в качестве пищи по 1 мл ежедневно кисломолочный пробиотический продукт кефир, γ – облучение 5 фракций по 2 Гр.
4-я экспериментальная группа в течение 10 суток получающая в качестве пищи по 1 мл ежедневно кисломолочный пробиотический продукт «ПробиоВит», предоставленный в ООО «Вега», γ – облучение 5 фракций по 2 Гр.

Облучение проводили во фракционированном режиме с дозой 2 Гр за фракцию ежедневно в течение 5 дней. Перед облучением животным из 2 группы вводили препарат Б190. В качестве источника ионизирующего излучения использовали гамма-установку для радиационных исследований РХ-γ-30 (ВО «Изотоп», 60Со), мощность дозы 0,9 Гр/мин ± 10%.

Радиопротекторные свойства исследуемых кисломолочных продуктов и радиопротекторного соединения Б190 оценивали по уровню летальности животных в каждой группе.

Для проведения гистологического исследования образцов тканей животных для всех экспериментальных групп поле облучения на 5е сутки из эксперимента выводили по 3 особи. От каждого животного были получены образцы органов и тканей: головной мозг, печень, почки, селезенка, костный мозг, желудочно-кишечный тракт. Образцы органов и тканей помещаются в 10% раствор формалина (забуференный нейтральный).

Для исследования микробиоты у животных каждой из экспериментальных групп в день 0 (до облучения) и на 5е сутки после облучения были получены образцы кала. Биоматериал помещали в пробирку с этанолом, для фиксации образца, в морозильник с температурой -20град.С для дальнейшего хранения.

Взвешивание животных в эксперименте будет проводиться в соответствии с СОП 02-02 «Взвешивание лабораторных животных.» Внутрижелудочное введение будет проводиться в соответствии с СОП 04-01 «Внутрижелудочное введение мелким лабораторным животным».

##     Group                Day             Dead       
##  Length:113         Min.   : 7.00   Min.   :0.0000  
##  Class :character   1st Qu.:14.00   1st Qu.:1.0000  
##  Mode  :character   Median :16.00   Median :1.0000  
##                     Mean   :18.05   Mean   :0.8496  
##                     3rd Qu.:18.00   3rd Qu.:1.0000  
##                     Max.   :35.00   Max.   :1.0000

3.2 Результаты

3.2.1 Выживаемость

Анализ выживаемости животных в эксперименте приведен на кривой выживаемости (Каплана-Мейера) на Рисунке 3.1

Figure 3.1: Анализ выживаемости животных в эксперименте Пробиотик 2 (фракционированное облучение, большая выборка), кривая Каплана-Мейера

Анализ выживаемости в группе, получавшей экспериментальный препарат, в сравнении с контрольной группой (п.о. физ. р.-р., фракционированное облучение 2Гр х5) приведен на Рисунке 3.2

Figure 3.2: Кривая Каплана-Майера для группы Контроль и Пробиотик

Анализ выживаемости в группе, получавшей радиопротектор Б190, в сравнении с контрольной группой (п.о. физ. р.-р., фракционированное облучение 2Гр х5) приведен на Рисунке 3.3

Figure 3.3: Кривая Каплана-Майера для группы Контроль и Б190

Также на Рисунке 3.4 приведен график анализа рисков (Hazard ratio), можно отметить, что риск гибели животного в группе мышей, получавших пробиотик (Prob), в практически на 50 процентов ниже, чем в контрольной группе (HR = 0.47, p = 0.013).

Figure 3.4: Анализ рисков (hazard ratio, HR) в эксперименте Пробиотик 2 (фракционированное облучение, большая выборка)

2022-10-10_RK_exp_report

2022-10-12