1 Описание эксперимента

Перед началом эксперимента все животные содержались в карантине не менее 10 дней в надлежащих условиях, без ограничения доступа к корму и питью. Перед введением в эксперимент животные рассажены в клетки (не более 8 мышей в клетке) в соответствии со сформированными группами. Контроль массы животных проводился на момент формирования групп и затем раз в 7 суток до окончания эксперимента. Группам 2-6 в день начала эксперимента внутрибрюшинно была перевита суспензия клеток клеточной линии аденокарцинома Эрлиха (200 мкл, концентрация 6*10^5 на животное). На 7-е сутки после перевивки опухолевых клеток будет животным в группах 2-6 проведена перфузия брюшной полости, раствор для перфузии выбирается в соответствии с принадлежностью животного к конкретной исследуемой группе.

Table 1.1: Описательная статистика К+ в асците, ммоль/л
Group Day Среднее СКО Мин. Q1 Медиана Q3 Макс.
Аскорбиновая кислота 7 12.60 2.00 9.75 11.13 12.27 13.96 16.61
Аскорбиновая кислота 14 17.62 5.34 12.43 13.35 17.58 21.85 22.89
Аскорбиновая кислота 18 16.66 5.35 12.87 14.76 16.66 18.55 20.44
Гидрокарбонат натрия 7 14.76 3.25 10.80 12.62 13.59 17.75 20.47
Гидрокарбонат натрия 14 21.78 8.97 14.93 16.00 18.78 24.56 34.62
Гидрокарбонат натрия 18 20.17 1.41 18.73 19.09 20.23 21.31 21.51
Контроль 7 13.42 3.02 10.53 10.98 13.37 15.81 16.41
Серебро 7 9.38 4.41 4.80 6.33 9.23 11.17 18.77
Серебро 14 21.43 2.58 19.40 19.76 20.60 22.27 25.10
Серебро 18 17.43 NA 17.43 17.43 17.43 17.43 17.43
Физ. р-р 7 14.98 1.61 11.14 13.90 15.41 15.77 17.43
Физ. р-р 14 17.07 1.40 15.81 15.96 16.89 18.00 18.70
Физ. р-р 18 13.35 NA 13.35 13.35 13.35 13.35 13.35

Данные по изменения концентрации Na+ и K+ представлены на Рисунке 1.1 и Рисунке 1.3.

Содержание Na+ в асците и сыворотке эксперименталньных животных

Figure 1.1: Содержание Na+ в асците и сыворотке эксперименталньных животных

Содержание Na+ в асците эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, $*$: p <= 0.05, $**$: p <= 0.01, $***$: p <= 0.001, $****$: p <= 0.0001)

Figure 1.2: Содержание Na+ в асците эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, \(*\): p <= 0.05, \(**\): p <= 0.01, \(***\): p <= 0.001, \(****\): p <= 0.0001)

Содержание K+ в асците и сыворотке эксперименталньных животных

Figure 1.3: Содержание K+ в асците и сыворотке эксперименталньных животных

Содержание K+ в асците эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, $*$: p <= 0.05, $**$: p <= 0.01, $***$: p <= 0.001, $****$: p <= 0.0001)

Figure 1.4: Содержание K+ в асците эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, \(*\): p <= 0.05, \(**\): p <= 0.01, \(***\): p <= 0.001, \(****\): p <= 0.0001)

2 Выживаемость и риски

Выживаемость в “прикидочном” эксперименте (сентябрь 2020 г.) представлена на Рисунке 2.1

График выживаемости (все экспериментальные группы).

Figure 2.1: График выживаемости (все экспериментальные группы).

На основании полученных в предварительном эксперименте данных проведены следующие изменения в протоколе: уменьшено количество клеток опухоли на животное при перевивке (6*10^5 на мышь(?)), изменена концентрация гидрокарбоната натрия (уменьшена с 4% до 1%), стандартизирована процедура промывки брюшной полости при перфузии. Выживаемость в эксперименте (январь 2020 г.) представлена на Рисунке 2.2, Рисунке 2.3.

График выживаемости (все экспериментальные группы).

Figure 2.2: График выживаемости (все экспериментальные группы).

График выживаемости (pH+)

Figure 2.3: График выживаемости (pH+)

Отношение рисков (Hazard Ratio)

Figure 2.4: Отношение рисков (Hazard Ratio)

С целью проверки полученных данных, а также выяснения причины совпадения выживаемости группы контроль с группами получавшими терапию (pH0, pH+) в марте 2021г. проведен повторный эксперимент (7е сутки, перевивка 8*10^5 клеток на мышь), полученные данные по выживаемости в исследуемых группах представлены на Рисунке 2.5. Для всех животных в эксперименте было проведено вскрытие, дано макроскопическое описание органов брюшной полости, также проведено гистологическое исследование поджелудочной железы и ЖКТ.

График выживаемости (все экспериментальные группы).

Figure 2.5: График выживаемости (все экспериментальные группы).

Отношение рисков (Hazard Ratio)

Figure 2.6: Отношение рисков (Hazard Ratio)

3 Эксперимент перузия от 2021.04.16

Описание групп:

Данные по выживаемости в исследуемых группах представлены на Рисунке 3.1.

## Call:
## coxph(formula = Surv(Day, Dead) ~ Group, data = AKE_Mice_042021)
## 
##   n= 24, number of events= 22 
## 
##              coef exp(coef) se(coef)      z Pr(>|z|)    
## GrouppH0 -0.68181   0.50570  0.53998 -1.263 0.206712    
## GrouppH+ -2.93772   0.05299  0.80871 -3.633 0.000281 ***
## ---
## Signif. codes:  0 '***' 0.001 '**' 0.01 '*' 0.05 '.' 0.1 ' ' 1
## 
##          exp(coef) exp(-coef) lower .95 upper .95
## GrouppH0   0.50570      1.977   0.17549    1.4572
## GrouppH+   0.05299     18.873   0.01086    0.2585
## 
## Concordance= 0.77  (se = 0.047 )
## Likelihood ratio test= 18.76  on 2 df,   p=8e-05
## Wald test            = 13.47  on 2 df,   p=0.001
## Score (logrank) test = 17.53  on 2 df,   p=2e-04
Кривая выживаемости (регрессия Кокса, данные от 04.2021).

Figure 3.1: Кривая выживаемости (регрессия Кокса, данные от 04.2021).

График выживаемости (все экспериментальные группы).

Figure 3.2: График выживаемости (все экспериментальные группы).

4 {r GrHRall042021, fig.height = 4, fig.width = 6, fig.align = "center", fig.cap="Отношение рисков (Hazard Ratio)", echo=FALSE} # # AKE_Mice_042021 <- read_excel("2021-05-21_KaplanM.xlsx") # # AKE_Mice_042021$Group <- factor(AKE_Mice_042021$Group, levels = c("Контроль","pH0","pH+")) # # fit.coxph <- coxph(Surv(Day, Dead) ~ Group, data=AKE_Mice_042021) # ggforest(fit.coxph, data = AKE_Mice_042021) # ggsave("plot_hazard_042021.jpg", width=10, height=6) # #

Измерение уровня Na+ и K+ в клетках асцита и асцитной жидкости проводилось в день перфузии (7е сутки эксперимента), на 14е и 18е сутки.

Num Group K Na Date Day Scource
1 Контроль 14.17 128.7 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
2 Контроль 18.74 140.9 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
3 Контроль 17.08 142.1 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
4 Контроль 14.09 149.7 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
5 Контроль 18.05 142.8 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
6 Контроль 15.76 131.4 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
7 Контроль 16.32 131.4 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
8 Контроль 10.73 146.7 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
10 Контроль 15.74 148.1 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
12 Контроль 10.90 146.4 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
13 Контроль 16.92 129.2 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
14 Контроль 16.66 139.2 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
15 Контроль 12.06 143.0 2021-04-23 00:00:00 7 ascitic
6 pH0 12.91 142.8 2021-04-30 00:00:00 14 ascitic
15 pH+ 19.06 132.7 2021-04-30 00:00:00 14 ascitic
17 Контроль 12.78 141.6 2021-04-30 00:00:00 14 ascitic
26 pH0 21.93 142.6 2021-04-30 00:00:00 14 ascitic
28 pH0 15.27 141.7 2021-04-30 00:00:00 14 ascitic
35 pH+ 23.33 151.0 2021-04-30 00:00:00 14 ascitic
25 pH+ 15.98 136.4 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
34 pH+ 13.00 137.9 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
24 pH+ 15.10 117.9 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
12 pH0 17.72 138.5 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
4 pH0 7.15 136.1 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
37 pH0 7.58 134.1 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
20 Контроль 16.04 134.9 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
21 Контроль 9.17 135.0 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
31 Контроль 12.40 123.3 2021-05-04 00:00:00 18 ascitic
1 Контроль 41.70 82.8 2021-04-23 00:00:00 7 cell
2 Контроль 42.10 70.2 2021-04-23 00:00:00 7 cell
3 Контроль 47.70 57.4 2021-04-23 00:00:00 7 cell
4 Контроль 51.50 73.0 2021-04-23 00:00:00 7 cell
5 Контроль 62.60 70.9 2021-04-23 00:00:00 7 cell
6 Контроль 39.70 63.9 2021-04-23 00:00:00 7 cell
6 pH0 33.70 72.6 1900-03-12 14:24:00 14 cell
15 pH+ 46.60 48.7 1900-02-17 16:48:00 14 cell
17 Контроль 26.30 53.2 1900-02-22 04:48:00 14 cell
26 pH0 49.10 51.1 1900-02-20 02:24:00 14 cell
28 pH0 30.10 65.3 1900-03-05 07:12:00 14 cell
35 pH+ 60.30 46.4 1900-02-15 09:36:00 14 cell
25 pH+ 33.50 67.9 2021-05-04 00:00:00 18 cell
34 pH+ 43.70 48.9 2021-05-04 00:00:00 18 cell
24 pH+ 51.30 62.2 2021-05-04 00:00:00 18 cell
12 pH0 55.50 69.7 2021-05-04 00:00:00 18 cell
4 pH0 31.30 58.9 2021-05-04 00:00:00 18 cell
37 pH0 31.90 35.1 2021-05-04 00:00:00 18 cell
20 Контроль 33.10 44.0 2021-05-04 00:00:00 18 cell
21 Контроль 28.90 60.7 2021-05-04 00:00:00 18 cell
31 Контроль 32.00 43.9 2021-05-04 00:00:00 18 cell
Table 4.1: Описательная статистика К+ в асцитной жидкости, ммоль/л
Group Day Среднее СКО Мин. Q1 Медиана Q3 Макс.
pH+ 14 21.19500 3.019346 19.06 20.1275 21.195 22.2625 23.33
pH+ 18 14.69333 1.531056 13.00 14.0500 15.100 15.5400 15.98
pH0 14 16.70333 4.677706 12.91 14.0900 15.270 18.6000 21.93
pH0 18 10.81667 5.982327 7.15 7.3650 7.580 12.6500 17.72
Контроль 7 15.17077 2.610085 10.73 14.0900 15.760 16.9200 18.74
Контроль 14 12.78000 NA 12.78 12.7800 12.780 12.7800 12.78
Контроль 18 12.53667 3.437038 9.17 10.7850 12.400 14.2200 16.04
Table 4.1: Описательная статистика Na+ в асцитной жидкости, ммоль/л
Group Day Среднее СКО Мин. Q1 Медиана Q3 Макс.
pH+ 14 21.19500 3.019346 19.06 20.1275 21.195 22.2625 23.33
pH+ 18 14.69333 1.531056 13.00 14.0500 15.100 15.5400 15.98
pH0 14 16.70333 4.677706 12.91 14.0900 15.270 18.6000 21.93
pH0 18 10.81667 5.982327 7.15 7.3650 7.580 12.6500 17.72
Контроль 7 15.17077 2.610085 10.73 14.0900 15.760 16.9200 18.74
Контроль 14 12.78000 NA 12.78 12.7800 12.780 12.7800 12.78
Контроль 18 12.53667 3.437038 9.17 10.7850 12.400 14.2200 16.04
Table 4.2: Описательная статистика К+ в клетках асцита, ммоль/л
Group Day Среднее СКО Мин. Q1 Медиана Q3 Макс.
pH+ 14 53.45000 9.687363 46.6 50.025 53.45 56.875 60.3
pH+ 18 42.83333 8.931592 33.5 38.600 43.70 47.500 51.3
pH0 14 37.63333 10.092241 30.1 31.900 33.70 41.400 49.1
pH0 18 39.56667 13.801932 31.3 31.600 31.90 43.700 55.5
Контроль 7 47.55000 8.575255 39.7 41.800 44.90 50.550 62.6
Контроль 14 26.30000 NA 26.3 26.300 26.30 26.300 26.3
Контроль 18 31.33333 2.177919 28.9 30.450 32.00 32.550 33.1
Table 4.2: Описательная статистика Na+ в клетках асцита, ммоль/л
Group Day Среднее СКО Мин. Q1 Медиана Q3 Макс.
pH+ 14 53.45000 9.687363 46.6 50.025 53.45 56.875 60.3
pH+ 18 42.83333 8.931592 33.5 38.600 43.70 47.500 51.3
pH0 14 37.63333 10.092241 30.1 31.900 33.70 41.400 49.1
pH0 18 39.56667 13.801932 31.3 31.600 31.90 43.700 55.5
Контроль 7 47.55000 8.575255 39.7 41.800 44.90 50.550 62.6
Контроль 14 26.30000 NA 26.3 26.300 26.30 26.300 26.3
Контроль 18 31.33333 2.177919 28.9 30.450 32.00 32.550 33.1
Содержание K+ в асцитной жидкости эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, $*$: p <= 0.05, $**$: p <= 0.01, $***$: p <= 0.001, $****$: p <= 0.0001)

Figure 4.1: Содержание K+ в асцитной жидкости эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, \(*\): p <= 0.05, \(**\): p <= 0.01, \(***\): p <= 0.001, \(****\): p <= 0.0001)

Содержание Na+ в асцитной жидкости эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, $*$: p <= 0.05, $**$: p <= 0.01, $***$: p <= 0.001, $****$: p <= 0.0001)

Figure 4.2: Содержание Na+ в асцитной жидкости эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, \(*\): p <= 0.05, \(**\): p <= 0.01, \(***\): p <= 0.001, \(****\): p <= 0.0001)

Содержание K+ в клетках асцита эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, $*$: p <= 0.05, $**$: p <= 0.01, $***$: p <= 0.001, $****$: p <= 0.0001)

Figure 4.3: Содержание K+ в клетках асцита эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, \(*\): p <= 0.05, \(**\): p <= 0.01, \(***\): p <= 0.001, \(****\): p <= 0.0001)

Содержание Na+ в клетках асцита эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, $*$: p <= 0.05, $**$: p <= 0.01, $***$: p <= 0.001, $****$: p <= 0.0001)

Figure 4.4: Содержание Na+ в клетках асцита эксперименталньных животных (ns: p > 0.05, \(*\): p <= 0.05, \(**\): p <= 0.01, \(***\): p <= 0.001, \(****\): p <= 0.0001)