Электрическая пропись работ по мечению белка (ЧСА) и смеси пептидов радиоактивной меткой ¹²⁵I для исследования биораспределения in vivo

Процедура мечения препарата (на примере ЧСА).

Состав реакционной смеси:
* 20 мкл 50 mМ \(KI\)
+ 40 мкл 0,5 М \(KH_2PO_4\)
+ 5 мкл \(Na^{125}I\) (9,25 ГБк/мл)
+ 200 мкл ЧСА 20%
+ 100 мкл хлорамина Т (20 мг/мл)
+ 200 мкл 0.1M раствора \(Na_2S_2O_3\)
Описание процедуры мечения:
1. В пробирке Eppendorf 2 мл (Пробирки 2 мл, типа Эппендорф, с замком Safe-Lock, бесцветные, 1000 шт./уп., Eppendorf) смешали 20 мкл 50 mМ \(KI\) и 40 мкл 0,5 М КН2Р04.
2. В полученную реакционную смесь вносили метку - 5 мкл \(Na^{125}I\) (9,25 ГБк/мл).
3. Добавляли 200 мкл сывороточного альбумина человека 20%.
4. После добавления 0,1 мл хлорамина Т (20 мг/мл) смесь активно пипетируется.
5. Через 40-45 сек. процесс останавливают добавлением 200 мкл 0.1M раствора \(Na_2S_2O_3\).
6. Степень йодирования зависит: от концентрации хлорамина Т, от продолжительности инкубации и от специфической активности метки.

---

Не связавшийся йод и окислитель удаляется на гравитационных микроколонках (сефадекс G-10). Радиохимическую чистоту меченных ¹²⁵I препаратов подтверждали методами тонкослойной хроматографии с последующим анализом радиоактивности фракций в сцинтилляционном счётчике.

Альбумин

ЧСА 20% р-р для инфузий. Молекулярная масса альбумина 65000 Да.
Прохождение через гравитациооную колонку ЧСА и свободной метри (Na¹²⁵I).

## # A tibble: 17 x 4
##    Fraction Albumine Iodine   Vol
##       <dbl>    <dbl>  <dbl> <dbl>
##  1        1    0.055     37   200
##  2        2    0         65   200
##  3        3    0.156    193   200
##  4        4   26.5      832   200
##  5        5   50.9     1349   200
##  6        6   50.6     2877   200
##  7        7   33.5    12016   200
##  8        8    4.64   66933   200
##  9        9    0.54  135586   200
## 10       10    0     112947   200
## 11       11    0      43639   200
## 12       12    0       6286   200
## 13       13    0       1164   200
## 14       14    0        811   200
## 15       15    0        616   200
## 16       16    0        541   200
## 17       17    0        486   200

Выход альбумина и свободного ¹²⁵I из гравитационной колонки (фракция 5 капель или 200 мкл):

При проведении процедуры очистки меченного препарата ЧСА от несвязанного йода собирались фракции с 4 по 6 (16-30 капли, общий объем 600 мкл).
После мечения препарата ЧСА радиоактивной меткой проводили исследвоание стабильности полученного препарата: через 12 часов после проведения процедуры мечения и очистки препарата ЧСА проводилась тонкослойная хроматография

Техника безопасности

Процедура мечения проводится в специально подготовленных помещениях с разрешением на работу с источниками ионизирующего излучения персоналов включённым в списокр персонала группы А.