Liberty Blue 2.0™

详细交互式操作与化学参考指南

快速入门

本节整合了首次操作仪器最核心的步骤，包括关键安全须知、基本合成流程和树脂处理。请务必在操作前熟悉所有内容。

⚠ 关键安全须知

  • 仪器的安装必须由 CEM 认证的维修技术人员完成。
  • 操作前，务必佩戴安全眼镜、防化手套和实验服。
  • 仪器产生的废液具有危险性，需根据安全规范妥善处理。
  • 请仅使用 CEM 官方提供或认可的耐压瓶及消耗品。
  • 熟悉所有化学品的安全数据说明书 (SDS)。

✔ 首次运行检查清单

  • 废液桶有足够容量并正确放置。
  • 通风管路已连接至通风橱。
  • 所有试剂均已就位且溶液在有效期内。
  • 氮气供应充足且压力在 45-100 psi 之间。
  • 光纤探头已完全插入反应容器的测温套管底部。

简化合成工作流程

①
准备与加载

计算用量，配制试剂，加载树脂，并进行最终检查。

②
运行方法

在软件中加载方法到队列，点击“播放”开始合成。

③
完成与收集

等待运行指示灯变绿，按规程取出树脂产物进行切割。

化学参考

本区域汇集了成功进行多肽合成所需的关键化学数据和试剂信息。您可以在此快速查询试剂浓度、稳定性、树脂选择建议以及常见副反应的处理方法。

标准试剂与浓度

选择合成规模:
试剂浓度

试剂溶液建议使用寿命

树脂选择与注意事项

  • 树脂目数: 只能使用 100-200目 (大于75微米) 的树脂。使用更细的树脂会导致筛板堵塞。
  • 推荐树脂:
    酸 (Acid): < 25 AAs 用 Preloaded Wang PS Resin; > 25 AAs 用 Preloaded Wang ProTide Resin.
    酰胺 (Amide): < 25 AAs 用 Rink Amide ProTide Resin; > 25 AAs 用 Rink Amide ProTide (LL) Resin.
反应容器 (RV) 限制▼
规模RV树脂量
0.005-0.20 mmol30-mL RVUp to 1.0 g
0.30-0.50 mmol50-mL RVUp to 2.0 g
1.0-5.0 mmol125-mL RVUp to 4.5 g
HT 加载器限制▼

注意: 0.005-0.025 mmol 和 1.0-5.0 mmol 规模与 HT 加载器不兼容。

规模RV兼容性
0.05-0.20 mmol30-mL RV兼容
0.30 mmol50-mL RV兼容
0.40 mmol (>0.3 mmol/g)50-mL RV兼容
0.50 mmol50-mL RV不兼容

副反应处理与合成优化

常见副反应

  • 天冬酰亚胺形成: 推荐使用 Fmoc-Asp(OMpe)-OH。对于 Asp-Gly 序列, 使用 Fmoc-Asp(OtBu)-(Dmb)Gly-OH。
  • 组氨酸差向异构化: 推荐使用 Fmoc-His(Boc)-OH, 它在高温下更稳定。
  • HBTU/DIEA 导致的封端: 长时间偶联时可能发生 (+101 on MS)。可改用 DIC/Oxyma 体系。

合成优化技巧

  • 对于困难区域、>25残基或精氨酸，使用双偶联 (Double Coupling)。
  • 对于困难或长肽链，使用低取代度 PEG-PS 核心树脂 (如 ProTide)。
  • 对于疏水区域 (Ala, Pro, Val, Leu等)，使用双偶联。

多肽切割与分析

切割

仪器本身不执行切割。推荐切割液: TFA/TIS/H2O/DODT (92.5/2.5/2.5/2.5)。

切割条件: 使用 Razor™ 在 40-42°C 下切割30分钟，或室温下切割3小时。

常见质谱差异排错

质量差可能原因
+100 / +56 / +242 / +252Boc / tBu / Trt / Pbf 保护基未脱除
-57 / -71 / -113 等对应氨基酸 (Gly/Ala/Leu) 缺失
-18 / +67天冬酰亚胺副反应
+101四甲基胍封端副反应
+23 / +39 / +114Na+ / K+ / TFA 盐

操作与方法

本节详细介绍了仪器的核心操作步骤，包括软件方法设置，标准合成流程，以及使用 HT 选件的特殊流程。

软件方法设置 (Liberty Method)

  1. 从导航栏选择 "Methods"。点击添加图标创建新方法。
  2. 输入序列，选择合成规模 (Synthesis Scale) 和 C-端 (C-Terminus)。
  3. 选择树脂类型 (Resin Type): "Preloaded" (已预载) 或 "Not Preloaded" (未预载)。
  4. 为每个氨基酸分配偶联周期 (Cycle)。默认对精氨酸使用双偶联，对其它使用单偶联。
  5. 设置树脂溶胀周期 (Resin Cycle) 和最终脱保护周期 (Final Deprotection Cycle)。
  6. 保存方法。

标准合成流程 (仅使用反应容器)

  1. 加载方法: 在 "Synthesis" 界面，将创建好的方法拖拽或加载到反应容器位置。
  2. 准备试剂: 使用计算器确定用量，配制并放置好所有溶液。
  3. 加载树脂: 称取干树脂放入反应容器中，并将容器装回仪器。
  4. 运行: 点击“播放”图标开始合成。运行指示器将变为黄色，完成后变为绿色。
  5. 收集产物: 合成结束后，取出反应容器，用溶剂将树脂冲洗到收集管中。

HT4/12 选件合成流程

  1. 配置软件: 在 "Settings > System Settings > HT" 中，选择对应的 "HT4" 或 "HT12" 配置。
  2. 加载方法: 在 "Synthesis" 界面，将多个方法加载到 HT 序列的不同位置。
  3. 加载树脂: 分别称量好每个序列的树脂，放入对应的 HT 树脂管中，并安装到 HT 模块上。
  4. 运行: 点击“播放”图标。仪器将自动按顺序转移树脂、进行合成，并将合成完的树脂转回原位。
  5. 收集产物: 待序列完成后，从 HT 模块上取下对应的树脂管。

维护与排错

为保证仪器长期稳定运行，常规维护至关重要。此处列出了详细的维护计划和关键操作步骤。

常规维护计划与操作

每日维护▼
  • 清空废液桶。
  • 填充主溶剂和脱保护液。
每两周维护▼
  • 反冲所有试剂位 (主溶剂除外)。
  • 更换氨基酸和活化剂溶液。
每月维护▼
  • 执行定时加液校准 (Timed Addition Calibrations)。
  • 执行反应容器排液测试 (Drain Test)。
  • 检查微波加热是否正常。
每半年维护▼
  • 更换主溶剂和脱保护液的在线过滤器。
  • 更换反应容器 (或根据软件维护追踪器提示)。
长期闲置程序 (Standby)▼

如果仪器将闲置超过两周，需清空所有试剂和管路，并对系统进行减压处理。具体步骤请参考完整手册。

系统规格

本节概述了 Liberty Blue 2.0 系统安装和运行所需的环境与硬件要求。

安装位置

  • 需置于通风橱内或有良好通风。
  • 坚固、不可燃的工作台。
  • 最小台面空间: 58.5 cm (宽) x 67.4 cm (深)。
  • 为可选的 HT 模块留出额外空间。

电气要求

  • 两个独立的接地电源接口。
  • 100-120 VAC, 50/60 Hz, 10 A 或
  • 200-240 VAC, 50/60 Hz, 5 A。
  • 电压波动不超过 ±10%。

环境与气体

  • 仅限室内使用。
  • 操作温度: 10°C 至 29.4°C。
  • 相对湿度: 10% 至 85%, 无冷凝。
  • 惰性气体: 高纯度氮气或氩气 (纯度 >90%)，压力 45-100 psi。