Introducción

Este documento presenta un análisis basado en el Diseño de Bloques Completamente al Azar (DBCA)** para evaluar la influencia del pH y la marca en la actividad enzimática (AE). Se tienen los bloques para las marcas de enzimas 1, 2, 3 y 4 las cuales son sometidas a los tratamientos de pH 5, 6, 7 y 8

Carga de Librerías

library(readxl)
library(tidyverse)
library(apaTables)
library(car)
library(agricolae)

getwd()  # Ver directorio actual
## [1] "C:/Users/thoma/Dropbox/My PC (LAPTOP-VP55P98S)/Downloads/Rstudio"
setwd("C:/Users/thoma/Dropbox/My PC (LAPTOP-VP55P98S)/Downloads/Rstudio")  # Especificar directorio

#**Lectura de datos**
DBCA <- read_excel("DBCA.xlsx")
View(DBCA)
attach(DBCA)

#**Transformacion de variables**
PH <- factor(PH)
Marca <- factor(Marca)

#**Modelo lineal y ANOVA**
#El modelo presenta un ajuste alto, pues presenta un R² de 0.8857, por lo que es posible decir el 88.5% de la variabilidad enzimatica es explicada tanto por el pH y la marca esto pues cada uno presenta efectos significativos de pH con un p-valor 0.000115 y Marca con un p-valor 0.000570 indicando SI hay una diferencia significativa. Como tal el pH6 presenta un efecto negativo sobre la actividad enzimatica en comparacion al pH5 (p-valor 0.000299) mientras que pH8 presenta un efecto positivo al ser mas similar a pH5 por lo que presenta mayor actividad enzimatica en comparacion a pH6. Adicionalmente las marcas B, C y D presentan valores negativos respeccto a la marca A, por lo que su actividad enzimatica es menor en comparacion a la marca A.
modelo <- lm(AE ~ (PH + Marca))
summary(modelo)
## 
## Call:
## lm(formula = AE ~ (PH + Marca))
## 
## Residuals:
##      Min       1Q   Median       3Q      Max 
## -0.04250 -0.01812 -0.00875  0.01937  0.04500 
## 
## Coefficients:
##             Estimate Std. Error t value Pr(>|t|)    
## (Intercept)  0.80000    0.02385  33.545 9.16e-11 ***
## PHPH6       -0.14500    0.02550  -5.687 0.000299 ***
## PHPH7        0.03250    0.02550   1.275 0.234321    
## PHPH8        0.05250    0.02550   2.059 0.069568 .  
## MarcaB      -0.16750    0.02550  -6.570 0.000103 ***
## MarcaC      -0.13500    0.02550  -5.295 0.000497 ***
## MarcaD      -0.09750    0.02550  -3.824 0.004063 ** 
## ---
## Signif. codes:  0 '***' 0.001 '**' 0.01 '*' 0.05 '.' 0.1 ' ' 1
## 
## Residual standard error: 0.03606 on 9 degrees of freedom
## Multiple R-squared:  0.9314, Adjusted R-squared:  0.8857 
## F-statistic: 20.37 on 6 and 9 DF,  p-value: 9.227e-05
anova <- aov(modelo)
summary(anova)
##             Df  Sum Sq Mean Sq F value   Pr(>F)    
## PH           3 0.09575 0.03192   24.55 0.000115 ***
## Marca        3 0.06315 0.02105   16.19 0.000570 ***
## Residuals    9 0.01170 0.00130                     
## ---
## Signif. codes:  0 '***' 0.001 '**' 0.01 '*' 0.05 '.' 0.1 ' ' 1
#**Tablas**
apa.aov.table(lm_output = anova, filename="table1.doc", table.number = 1)
## 
## 
## Table 1 
## 
## ANOVA results using AE as the dependent variable
##  
## 
##    Predictor   SS df   MS       F    p partial_eta2 CI_90_partial_eta2
##  (Intercept) 1.46  1 1.46 1125.27 .000                                
##           PH 0.10  3 0.03   24.55 .000          .91         [.62, .92]
##        Marca 0.06  3 0.02   16.19 .001          .86         [.48, .88]
##        Error 0.01  9 0.00                                             
## 
## Note: Values in square brackets indicate the bounds of the 90% confidence interval for partial eta-squared
apa.1way.table(iv=PH, dv=AE, filename="tabla2.doc", table.number= 2, data=DBCA)
## 
## 
## Table 2 
## 
## Descriptive statistics for AE as a function of PH.  
## 
##   PH    M   SD
##  PH5 0.70 0.06
##  PH6 0.55 0.10
##  PH7 0.73 0.07
##  PH8 0.75 0.07
## 
## Note. M and SD represent mean and standard deviation, respectively.
## 
apa.d.table(iv = PH, dv = AE, data = DBCA, filename = "tabla3.doc", landscape=TRUE)
## 
## 
## Means, standard deviations, and d-values with confidence intervals
##  
## 
##   Variable M    SD   1             2            3            
##   1. PH5   0.70 0.06                                         
##                                                              
##   2. PH6   0.55 0.10 1.71                                    
##                      [-0.01, 3.35]                           
##                                                              
##   3. PH7   0.73 0.07 0.48          2.00                      
##                      [-0.95, 1.87] [0.18, 3.73]              
##                                                              
##   4. PH8   0.75 0.07 0.77          2.22         0.27         
##                      [-0.71, 2.19] [0.32, 4.03] [-1.13, 1.66]
##                                                              
## 
## Note. M indicates mean. SD indicates standard deviation. d-values are estimates calculated using formulas 4.18 and 4.19
## from Borenstein, Hedges, Higgins, & Rothstein (2009). d-values not calculated if unequal variances prevented pooling.
## Values in square brackets indicate the 95% confidence interval for each d-value. 
## The confidence interval is a plausible range of population d-values 
## that could have caused the sample d-value (Cumming, 2014). 
## 
#**Boxplot Actividad enzimatica v.s. pH
boxplot(split(AE, PH), xlab="Niveles de PH", ylab="Actividad Enzimática")

##**Analisis de supuestos**
#**Normalidad de los residuos**
#El p-valor es de 0.2584, indicando no hay residuos importantes, pues estos son absorbidos por los factores por lo que NO se rechaza la normalidad de los residuos.
normalidad <- shapiro.test(resid(modelo))
print(normalidad)
## 
##  Shapiro-Wilk normality test
## 
## data:  resid(modelo)
## W = 0.9316, p-value = 0.2584
qqPlot(anova)

## [1]  2 16
#**Homeocedasticidad**
#Se presenta un p-valor de 0.4922, lo cual indica NO se rechaza la homogeneidad de las varianzas, cumpliendose el supuesto de la homocedasticidad.
homocedasticidad <- bartlett.test(resid(modelo) ~ PH)
print(homocedasticidad)
## 
##  Bartlett test of homogeneity of variances
## 
## data:  resid(modelo) by PH
## Bartlett's K-squared = 2.4076, df = 3, p-value = 0.4922
homocedasticidad_bloque <- bartlett.test(resid(modelo) ~ Marca)
print(homocedasticidad_bloque)
## 
##  Bartlett test of homogeneity of variances
## 
## data:  resid(modelo) by Marca
## Bartlett's K-squared = 0.48391, df = 3, p-value = 0.9224
#**Valores predichos v.s. residuos
fitb <- fitted(anova)
res_stb <- rstandard(anova)

plot(fitb, res_stb, xlab="Valores Predichos", ylab="Residuos Estandarizados", abline(h=0))

##**Pruebas a posteriori**
#**Diferencia minima significativa**
#Se determina pH6 (b) es significativamente distinto de los demas niveles (pH 5, 7 y 8) mientras que el pH 5, 7 y 8 (a) no presentan diferencias significativas entre si 
outLSD <- LSD.test(anova, "PH", console=TRUE)
## 
## Study: anova ~ "PH"
## 
## LSD t Test for AE 
## 
## Mean Square Error:  0.0013 
## 
## PH,  means and individual ( 95 %) CI
## 
##         AE        std r         se       LCL       UCL  Min  Max    Q25   Q50
## PH5 0.7000 0.06218253 4 0.01802776 0.6592184 0.7407816 0.65 0.79 0.6650 0.680
## PH6 0.5550 0.10214369 4 0.01802776 0.5142184 0.5957816 0.47 0.70 0.4925 0.525
## PH7 0.7325 0.07274384 4 0.01802776 0.6917184 0.7732816 0.68 0.84 0.6950 0.705
## PH8 0.7525 0.07320064 4 0.01802776 0.7117184 0.7932816 0.65 0.81 0.7250 0.775
##        Q75
## PH5 0.7150
## PH6 0.5875
## PH7 0.7425
## PH8 0.8025
## 
## Alpha: 0.05 ; DF Error: 9
## Critical Value of t: 2.262157 
## 
## least Significant Difference: 0.05767392 
## 
## Treatments with the same letter are not significantly different.
## 
##         AE groups
## PH8 0.7525      a
## PH7 0.7325      a
## PH5 0.7000      a
## PH6 0.5550      b
#**Tukey**
#Confirma los resultados obtenidos con LSD, resaltando nuevamente el pH6 presenta una actividad enzimatica significativamente distinta, siendo esta menor a la presentada en pH5, 7 y 8 los cuales no presentan diferencias significativas entre si.
outHSD <- HSD.test(anova, "PH", console=TRUE)
## 
## Study: anova ~ "PH"
## 
## HSD Test for AE 
## 
## Mean Square Error:  0.0013 
## 
## PH,  means
## 
##         AE        std r         se  Min  Max    Q25   Q50    Q75
## PH5 0.7000 0.06218253 4 0.01802776 0.65 0.79 0.6650 0.680 0.7150
## PH6 0.5550 0.10214369 4 0.01802776 0.47 0.70 0.4925 0.525 0.5875
## PH7 0.7325 0.07274384 4 0.01802776 0.68 0.84 0.6950 0.705 0.7425
## PH8 0.7525 0.07320064 4 0.01802776 0.65 0.81 0.7250 0.775 0.8025
## 
## Alpha: 0.05 ; DF Error: 9 
## Critical Value of Studentized Range: 4.41489 
## 
## Minimun Significant Difference: 0.07959056 
## 
## Treatments with the same letter are not significantly different.
## 
##         AE groups
## PH8 0.7525      a
## PH7 0.7325      a
## PH5 0.7000      a
## PH6 0.5550      b
plot(TukeyHSD(anova, "PH"))

#**Otras Pruebas de comparacion de medias**
#El comportamiento presentado para las pruebas de LSD y HSD se presenta nuevamente confirmando el pH6 presenta una actividad enzimatica significativamente diferente a los pH 5, 7 y 8.
SNK.test(anova, "PH", console=TRUE)  # Student-Newman-Keuls
## 
## Study: anova ~ "PH"
## 
## Student Newman Keuls Test
## for AE 
## 
## Mean Square Error:  0.0013 
## 
## PH,  means
## 
##         AE        std r         se  Min  Max    Q25   Q50    Q75
## PH5 0.7000 0.06218253 4 0.01802776 0.65 0.79 0.6650 0.680 0.7150
## PH6 0.5550 0.10214369 4 0.01802776 0.47 0.70 0.4925 0.525 0.5875
## PH7 0.7325 0.07274384 4 0.01802776 0.68 0.84 0.6950 0.705 0.7425
## PH8 0.7525 0.07320064 4 0.01802776 0.65 0.81 0.7250 0.775 0.8025
## 
## Alpha: 0.05 ; DF Error: 9 
## 
## Critical Range
##          2          3          4 
## 0.05767392 0.07118246 0.07959056 
## 
## Means with the same letter are not significantly different.
## 
##         AE groups
## PH8 0.7525      a
## PH7 0.7325      a
## PH5 0.7000      a
## PH6 0.5550      b
scheffe.test(anova, "PH", console=TRUE)  # Scheffé
## 
## Study: anova ~ "PH"
## 
## Scheffe Test for AE 
## 
## Mean Square Error  : 0.0013 
## 
## PH,  means
## 
##         AE        std r         se  Min  Max    Q25   Q50    Q75
## PH5 0.7000 0.06218253 4 0.01802776 0.65 0.79 0.6650 0.680 0.7150
## PH6 0.5550 0.10214369 4 0.01802776 0.47 0.70 0.4925 0.525 0.5875
## PH7 0.7325 0.07274384 4 0.01802776 0.68 0.84 0.6950 0.705 0.7425
## PH8 0.7525 0.07320064 4 0.01802776 0.65 0.81 0.7250 0.775 0.8025
## 
## Alpha: 0.05 ; DF Error: 9 
## Critical Value of F: 3.862548 
## 
## Minimum Significant Difference: 0.08678692 
## 
## Means with the same letter are not significantly different.
## 
##         AE groups
## PH8 0.7525      a
## PH7 0.7325      a
## PH5 0.7000      a
## PH6 0.5550      b
duncan.test(anova, "PH", console=TRUE)  # Duncan
## 
## Study: anova ~ "PH"
## 
## Duncan's new multiple range test
## for AE 
## 
## Mean Square Error:  0.0013 
## 
## PH,  means
## 
##         AE        std r         se  Min  Max    Q25   Q50    Q75
## PH5 0.7000 0.06218253 4 0.01802776 0.65 0.79 0.6650 0.680 0.7150
## PH6 0.5550 0.10214369 4 0.01802776 0.47 0.70 0.4925 0.525 0.5875
## PH7 0.7325 0.07274384 4 0.01802776 0.68 0.84 0.6950 0.705 0.7425
## PH8 0.7525 0.07320064 4 0.01802776 0.65 0.81 0.7250 0.775 0.8025
## 
## Alpha: 0.05 ; DF Error: 9 
## 
## Critical Range
##          2          3          4 
## 0.05767392 0.06019716 0.06165069 
## 
## Means with the same letter are not significantly different.
## 
##         AE groups
## PH8 0.7525      a
## PH7 0.7325      a
## PH5 0.7000      a
## PH6 0.5550      b
LSD.test(anova, "PH", p.adj= "bon", console=TRUE)  # Bonferroni
## 
## Study: anova ~ "PH"
## 
## LSD t Test for AE 
## P value adjustment method: bonferroni 
## 
## Mean Square Error:  0.0013 
## 
## PH,  means and individual ( 95 %) CI
## 
##         AE        std r         se       LCL       UCL  Min  Max    Q25   Q50
## PH5 0.7000 0.06218253 4 0.01802776 0.6592184 0.7407816 0.65 0.79 0.6650 0.680
## PH6 0.5550 0.10214369 4 0.01802776 0.5142184 0.5957816 0.47 0.70 0.4925 0.525
## PH7 0.7325 0.07274384 4 0.01802776 0.6917184 0.7732816 0.68 0.84 0.6950 0.705
## PH8 0.7525 0.07320064 4 0.01802776 0.7117184 0.7932816 0.65 0.81 0.7250 0.775
##        Q75
## PH5 0.7150
## PH6 0.5875
## PH7 0.7425
## PH8 0.8025
## 
## Alpha: 0.05 ; DF Error: 9
## Critical Value of t: 3.364203 
## 
## Minimum Significant Difference: 0.08577069 
## 
## Treatments with the same letter are not significantly different.
## 
##         AE groups
## PH8 0.7525      a
## PH7 0.7325      a
## PH5 0.7000      a
## PH6 0.5550      b
#**Conclusion**
#Frente al efecto negativo del pH6 seria mejor emplear un pH de 5, 7 o 8 para maximizar la actividad enzimatica, adicionalmente es recomendable ocupar la marca A, pues entre los pH con mayor actividad enzimatica la marca A presento una mayor AE en comparacion a las marcsas B, C y D